一.   實驗原理：試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被黃熱病毒的包被微孔中，依次加入標本、HRP標記的檢測抗原，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中黃熱病毒抗體（YFV-Ab）的存在與否。

二.  人黃熱病毒抗體(YFV-Ab)ELISA檢測試劑盒組成及其配置：

三.   常見問題解答：

1.     【高背景或陰性對照值偏高】

可能的原因：陰性對照孔被陽性對照或樣品污染；抗體非特異性結合；酶結合物過濃；孵育溫度過高；底物在使用前曝光；讀板前停留時間過長

上海軒澤康生物為您提供解決方案：洗滌時勿將洗液溢出孔外；建議更換封閉液；檢查酶結合物是否按照說明書規定稀釋；檢查孵育箱的溫度是否正確、穩定；應保存在暗處、避光；加終止液后3分鐘內讀數。

2.     【陽性對照值偏低或低吸光度】

可能的原因: 試劑未平衡至室溫;檢測體積偏小;孵育時間過短;底物受污染;樣本中有抑制劑。

上海軒澤康生物為您提供解決方案：實驗開始前，將試劑盒從冰箱內取出平衡至室溫（20-25℃）；檢查移液器吸液通道是否堵塞；使用計時器，準確孵育時間；使用新配置的試劑，重新實驗；疊氮鈉會抑制HRP酶的活性。

四. 人黃熱病毒抗體(YFV-Ab)ELISA檢測試劑盒操作注意事項

1.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶溶解后再使用。

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3.  預處理后的樣本無需稀釋，直接取50μL加樣即可。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

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